Vjernici na taj dan upućuju molitve Bogu za milost prema upokojenima i oproštaj grijehova.

Zadušnice uvijek padaju u subotu, kada se organizuju i bogosluženja posvećena upokojenima, jer je Hristos dan uoči Vaskrsenja, koje se uvijek slavi u nedjelju, proveo u grobu.

U Crkvi se na zadušnice pominju i riječi Svetog Јovana Zlatoustog, jednog od najvećih bogoslova: "Pomozite pokojnima i pominjite ih. Ne oklijevajte, dakle, da pomognete onima koji su otišli i prinesite vaše molitve za njih".

Na Zadušnice se u crkama služi Sveta liturgija i parastos na kojem sveštenik vinom preliva žito, a poslije službe se ide do grobova pokojnika. Na grobovima se prislužuju svijeće, a sveštenici obavljaju pojedinačne parastose i čitaju molitve za preminule.

Ako nije moguće otići na grob pokojnika, njima se služi pomen u crkvi.

Osim Miholjskih ili jesenjih zadušnica, u kalendaru Srpske pravoslavne crkve postoje još i Duhovske ili ljetne, proljećne - u sedmici prije početka Velikog posta i Mitrovske ili zimske.